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Mesure de fluorescence
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Technologie de fluorescence
Principe de mesure
Le principe de la désactivation de la fluorescence
Les caractéristiques d’émission d’un colorant sensitif qui a été excité afin de s’allumer dépendent du changement de la concentration de l’analyte dans le médium ambiant sur lequel le colorant réagit d’une manière sélective.
Lors d’une irradiation continue d’un colorant, l’intensité de la lumière fluorescente
diminue
par l’augmentation de la concentration de l’analyte, p.ex. de l’oxygène moléculaire.
Lors d’une irradiation modulée le retard d’extinction ainsi que la phase de la lumière fluorescente se changent dans la mesure où la concentration du médium ambiant se change.
La relation entre l’intensité et le retard d’extinction de la lumière fluorescente lors de l’absence de l’analyte (I0, t0) et lors de l’absence de l’analyte (I,t) étant donné par l’équation Stern-Volmer :
I0/I = t0/t = 1 + KSV [O
2
]
Principe de la désactivation de la fluorescence
Les courbes dans le diagramme ci-dessous montrent, par l’exemple de l’oxygène en tant qu’un analyte, l’augmentation de la sensitivité lors des concentrations réduites par rapport aux concentrations élevées de l’analyte.
Équitation Stern-Volmer
[
<br>
]
Le colorant spécifique et sensitif sera généralement fixé dans des membranes perméables. Celles-ci pourraient consister en polymères ou gels.
L’excitation du colorant résulte d’une lumière des longueurs d’onde courtes (p.ex. lumière bleue) et d’une fluorescence dans un gamme de la longueur d’onde (p.ex. lumière rouge). Les changements de cette lumière fluorescente peuvent être mesurés par des détecteurs correspondants (p.ex. photodiodes, lignes CCD).
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